Eliminación urinaria de progesterona y sus metabolitos en mujeres pre y postmenopáusicas sometidas a un programa de ejercicio aeróbico.

INTRODUCCIÓN.

Durante la menopausia tienen lugar importantes cambios hormonales. Así la postmenopausia está asociada a una deficiencia estrogénica, a un incremento de los niveles de andrógenos y a una disminución de los metabolitos urinarios de progesterona (Santoro et al. 1996; Liu et al. 2003). Estas alteraciones hormonales podrían ser responsables del incremento de morbilidad que caracteriza este período de la vida.
La realización de actividad física podría tener un efecto regulador importante sobre el metabolismo hormonal de las mujeres, aunque no necesariamente igual para las premenopáusicas y las postmenopáusicas. Una posible relación dinámica entre las cargas de ejercicio físicio y la función ovárica ha sido observada en múltiples estudios (Broocks et al, 1990; Panter-Brick et al, 1993; Warren et al, 2001). Se han observado bajos niveles de excreción de metabolitos de la progesterona durante las sesiones de competición en mujeres atletas, mientras que durante la sesión de descanso los valores retornaban a niveles normales (Morris et al, 1999a). Sin embargo, en los estudios en los que se evalúan los efectos del niveles moderados de actividad física, los resultados son inconsistentes, con algunos reportes que indican pequeñas reducciones en las hormonas ováricas esteroideas en respuesta al ejercicio físico (Bullen et al, 1984; Ellison and Lager, 1986; Keizer et al, 1987; Morris et al, 1999b)  y otros que reflejan que no se producen cambios en respuesta al ejercicio físico de moderada intensidad (Ronkainen et al, 1985; Prior et al, 1987).

MATERIAL Y MÉTODO.

Participan en este estudio 40 mujeres sedentarias, todas residentes en la ciudad de Cáceres, divididas en dos grupos: 20 mujeres premenopáusicas (edad 45.56 ± 4.06 años) y 20 postmenopáusicas (edad 52.27 ± 3.80 años) Cada participante firmó un consentimiento informado, garantizándose la confidencialidad de los datos, del mismo modo que se cumplieron los principios de la declaración de Helsinki y sus revisiones posteriores para estudios en humanos.
Como criterios de inclusión en el estudio hay que señalar: no tener historia de cáncer, diabetes mellitus ni desórdenes endocrinos. Ninguna mujer tomaba medicación que pudiera afectar a los parámetros del estudio, ni fumaba o consumía alcohol. Para ser incluidas en el dentro del grupo de postmenopáusicas se les exigió que presentaran al menos 12 meses de amenorrea, y que no estuviesen sometidas a TSH.
Una vez recogida la muestra inicial de orina, las participantes se sometieron a un programa de ejercicio físico de seis meses de duración, con una frecuencia semanal de tres días alternos, con una duración de 60 minutos cada sesión. El tipo de ejercicio a realizar, de carácter predominantemente aeróbico, eran clases coreografiadas de aeróbic.
Todas las participantes recogieron una muestra de la primera orina de la mañana. Las mujeres premenopáusicas recogieron sus muestras de orina el tercer día de la fase folicular de su ciclo menstrual, antes y después del programa de ejercicio físico. Las mujeres postmenopáusicas recogieron sus muestras de orina antes y después del programa de ejercicio. Las muestras fueron transportadas a la Universidad y fueron codificadas y congeladas a -20º C hasta el futuro análisis.
Los niveles de creatinina de todas las muestras  fueron determinadas con el objetivo de poder cuantificar la concentración relativa  de los esteroides con respecto a este parámetro urinario fundamental, usando el kit Creatinina Sigma 555-A y un espectrofotómetro UNICAM 5625. Estos niveles de creatinina permitieron realizar la corrección de las concentraciones de esteroides, con respecto a un parámetro urinario, expresándose de este modo los resultados en mg de esteroide/g creatinina.
Fue determinada la progesterona  y sus metabolitos urinarios: pregnandiol y pregnantriol. El procedimiento empleado fue el siguiente: a 2mL de orina, se le adicionan 250 ppb de methyltestosterona como patrón interno, el pH fue ajustado hasta un valor de 5 usando la adicción de ácido acético 1M y  un tampón de acetato pH 5 se añadió 50 ?L de arilsulfatasa y se dejó en el termobloque durante 15 horas a 50 º C, enfriándose posteriormente a temperatura ambiente. Después, tras ajustar el pH de la muestra a 9,5 para optimizar el proceso de extracción de los esteroides, la extracción se realizó con 2 ml de éter etílico.  Tras 30 minutos de agitación, la mezcla se centrifuga durante 5 minutos y la fase orgánica se seca bajo una corriente de nitrógeno. A los extractos de orina seca 50 ml de una mezcla de MSTFA: NH4I: Ditioeritritol (1000:2:4) (v: w: w) fue añadido. La mezcla de reacción se calienta en un termobloque durante 30 minutos a 60 º C para realizar la reacción de derivatización, y después, se encapsula y se inyecta en el cromatógrafo. El análisis GC / Q-MS de las muestras se llevó a cabo en un cromatógrafo Agilent Technologies 6890N con MS cuadrupolo 5973 espectrómetro de red.
Los resultados fueron analizados mediante el programa estadístico SPSS versión 17.0 para Windows, representándose los valores según su media ± desviación estándar. La normalidad de la distribución de las variables se evaluó mediante la prueba de Shapiro-Wilks. Se aplicaron prueba no paramétricas, concretamente el test de Wilcoxon para muestras autopareadas y la prueba de Mann-Whitney para medidas independientes.

RESULTADOS.

Los resultados muestran que no hay diferencias estadísticamente significativas entre los niveles urinarios de progesterona a nivel basal entre mujeres pre y postmenopáusicas (Tabla 1), pero sí se observa una menor excreción urinaria de los metabolitos de la progesterona en las mujeres postmenopáusicas (pregnantriol P=0.013; pregnandiol P=0.008).
Al valorar la influencia del programa de ejercicio no observamos cambios en las mujeres premenopáusicas, pero sin embargo las mujeres postmenopáusicas  incrementaron su excreción urinaria de los metabolitos de la progesterona tras el programa de aeróbic (pregnantriol 738.27±340.20 vs 1134.52±599.15 ng esteroide/mg creatinina antes y después del programa de ejercicio físico, respectivamente, P=0.018; prenandiol 657.08±358.10 vs 1078.72±642.15 ng esteroide/mg creatinina antes y después del programa de ejercicio físico, respectivamente, P=0.042)

DISCUSIÓN.

A nivel basal observamos que la excreción de metabolitos urinarios de la progesterona (pregnanediol y pregnanetriol) en mujeres postmenopáusicas es significativamente menor. Estos resultados son coincidentes con los obtenidos en estudios anteriores (Santoro et al, 1996; Liu et al, 2003). Todas estos cambios hormonales  podrían indicar una alteración en el funcionamiento del ovario  (Al-Azzawi and Palacios, 2009)
También se ha observado que en las mujeres premenopáusicas no se ha producido ninguna variación significativa como consecuencia del programa de ejercicio, coincidiendo estos resultados con otros estudios en donde los niveles de progestágenos  no sufren cambios tras un programa de ejercicio de actividad física moderada (Stoddard et al, 2007; Prior et al, 1987). La intensidad del ejercicio es un factor determinante para provocar variaciones en los niveles de estas hormonas, tal y como ha quedado puesto de manifiesto en otros estudios (Morris and Wark, 2001; Morris et al, 1999).
En las mujeres postmenopáusicas sí se produce una elevación significativa de los niveles de pregnantriol y pregnandiol, los principales metabolitos de la progesterona. La postmenopausia está conectada directamente con el hipoestrogenismo, sin embargo, la producción de progesterona no se ve afectada en la misma medida, puesto que la glándula adrenal se convierte en una fuente importante de producción de progesterona en las mujeres postmenopáusicas (Slayden et al, 1998). En cualquier caso, el aumento de la excreción urinaria de pregnanediol y pregnantriol indicaría un aumento en la síntesis de progesterona, probablemente como consecuencia de una activación en la glándula suprarrenal producida a partir del programa de ejercicio. Este aumento de progesterona en las mujeres postmenopáusicas tendría un efecto beneficioso para su salud. Por un lado, los niveles de progesterona pueden tener una influencia directa en los niveles de formación ósea (Morris et al, 1999), y por otro, progesterona and progestágenos parecen tener un efecto preventivo sobre el cáncer de mama (Pasqualini, 2009).
En resumen, se puede concluir que las mujeres postmenopáusicas presentaban importantes diferencias  en los niveles de progestógenos con respecto a las mujeres premenopáusicas. No obstante, la realización de actividad física moderada podría evitar la caída de progesterona en las mujeres postmenopáusicas.

ANEXO

Tabla 1.

Contenido disponible en el CD Colección Congresos nº 15